Lymfocyttseparasjonsmedium (rotte, mus)

Dette produktet er en separasjonsløsning med gradienttetthet som er egnet for separering av perifere blodlymfocytter fra rotter og mus. Prinsippet er hovedsakelig basert på tetthetsforskjellen mellom forskjellige perifere blodceller (tettheten av røde blodceller og granulocytter er ca. 1.090 g/ml; blodplate er 1.030-1,035 g/ ml Lymfocytt og monocytt er 1.075-1.090 g/ml) og er atskilt fra perifert blod ved gradienttetthet sentrifugering. Dette produktet er en steril separasjonsløsning med lavt endotoksinnivå, klar til bruk med en tetthet på 1,083 ± 0,001 g/ml (20 grader). Tettheten av gnagerlymfocytter er litt høyere enn for humane lymfocytter, og isolering av perifert blod fra mus er utsatt for hemolyse. Basert på disse egenskapene er produktet optimert på basis av tradisjonell Ficoll-meglumin for å opprettholde stabiliteten til separasjonsløsningen i lengre tid etter blodtilsetning, og operasjonen er enkel og de isolerte lymfocyttene har høy renhet og god tilstand.

Skip med våt is; Oppbevares mørkt ved 2-8 grader, gyldig i 12 måneder.

For separasjon av 1 mL lymfocytter fra perifert museblod er volumforholdet mellom blod og lymfocyttseparasjonsmedium 1:1-1:2, med passende justeringer innenfor dette området; Det bør utvises forsiktighet ved valg av sentrifugerør at det totale volumet av blod og lymfocyttseparasjonsmedium ikke overstiger to tredjedeler av volumet til røret.

1. Ta 1 mL ferskt antikoagulant fullblod (heparin, EDTA, natriumcitrat og andre antikoagulanter kan brukes), fortynnes med et like stort volum PBS (G4202 anbefales) eller Hanks buffer (anbefalt g4203) inneholder ikke kalsium og magnesium for å oppnå 2 ml fortynnet fullblod.

2. Pipetter 3 mL lymfocyttisoleringsløsning fra perifert blod fra rotter og mus inn i et 15 mL sterilt sentrifugerør (EP-1500-J anbefales).

3. Vipp sentrifugerøret ved 45 grader og tilsett sakte 2 mL fortynnet blod langs rørveggen inn i sentrifugerøret, slik at blodet ligger flatt på det øvre laget av det perifere blodlymfocyttseparasjonsmediet til rotter og mus.

4. Det anbefales å bruke en horisontal hodesentrifuge, plasser røret i den horisontale hodeadapteren, reduser hastigheten på sentrifugen (3-5 hastigheter er passende) og sentrifuger ved 800 xg i 25 minutter ved romtemperatur.

5. Etter sentrifugering holdes røret forsiktig på et rørstativ og en tydelig stratifisering observeres: det øverste laget er plasmalaget; det øvre mellomlaget er lymfocyttlaget; det nedre midterste laget er lymfocyttseparasjonsmediet; og det nederste laget er erytrocytt- og granulocyttlaget (se vedlagte figur).

6. Fjern det øverste plasmalaget og aspirer forsiktig tunica albuginea-laget (lymfocyttlaget) inn i et nytt sterilt sentrifugerør.

7. Vask med 8 mL PBS (anbefalt G4202) eller annen buffer, sentrifuger ved 100 xg i 10 minutter, og kast deretter supernatanten.

8. Gjenta trinn 7 (valgfritt).

9. Resuspensjon av lymfocytter i nødvendig medium eller buffer i henhold til formålet med eksperimentet.

1. Produktet må være fullstendig ekvilibrert og blandet opp ned ved romtemperatur før bruk. Riktig temperatur for separasjon er 18-25 grader.

2. For å opprettholde aktiviteten til lymfocytter, er det best å velge friskt antikoagulasjonsblod innen 2 timer etter blodinnsamling; Hvis ytterligere dyrking og test av de isolerte lymfocyttene er nødvendig, vær oppmerksom på den aseptiske operasjonen under blodinnsamling og separasjon.

3. Fortynning eller vask av bufferen, ikke bruk bufferen inneholder kalsium- og magnesiumioner for å unngå aggregering av blodceller.

4. Overdreven absorpsjon av komponenter utenfor tunica albuginea-laget av lymfocytter vil føre til at noen granulocytter eller blodplater i krysset blir blandet.

5. Forskjeller mellom blodprøver kan ha innvirkning på separasjonsresultatene. Sentrifugalkraften og tiden kan justeres hensiktsmessig i henhold til den faktiske situasjonen. Referansesentrifugalkraften og tidsområdet er 500-1000 g og 20-30 min.

6. Det er normalt at røde blodceller legger seg etter å ha blandet blod og lymfocyttseparasjonsmedium i en viss tid.

7. For din sikkerhet og helse, vennligst bruk vernebriller, hansker eller verneklær.

Vedlegg: Skjematisk diagram av hvert lag før og etter separasjon

Dette produktet er kun for vitenskapelige forskningsformål, ikke for klinisk diagnose!