Lysebuffer for røde blodlegemer

Red Blood Cell Lysis Buffer (ACK Lysis Buffer) er en klassisk lyseringsløsning designet for å fjerne røde blodceller uten å skade kjerneholdige celler. Erytrocytlysatet lyserer vevsceller som ikke inneholder erytrocytter og kan videre brukes til primærkultur, cellefusjon, flowcytometrisk analyse, separasjon og ekstraksjon av nukleinsyrer og proteiner. Grunnprinsippet er å lysere erytrocytter ved å bruke forskjellen i intracellulær osmolaritet for å få cellemembranen til å svelle. Hovedkomponentene inkluderer ammoniumklorid, kaliumbikarbonat og EDTA-Na2. Ammoniumioner kan ikke passere gjennom cellemembranen, mens andre ioner kan, noe som resulterer i forskjellen i ionekonsentrasjon mellom innsiden og utsiden av cellen, og diffusjon av eksternt vann inn i cellen, få de røde blodcellene til å svelle og oppnå lyseringseffekt. Produktet filtreres og steriliseres med 0.2 μm filtermembran.

Skip med våt is; Oppbevares ved 2-8 grad , gyldig i 12 måneder.

Vev/celleprøver:

1. Ferskt vev fordøyes av trypsin eller kollagenase og dispergeres i individuell cellesuspensjon. Sentrifuger ved 300-400 g i 5 minutter ved 4 grader og kast supernatanten.

2. Tilsett lyseringsbuffer for røde blodlegemer til celleutfellingen i forholdet 1:3-5, bland med forsiktig blåsing og lysér i 1-2 min.

3. Sentrifuger ved 800-1000 rpm i 5-8 min ved 4 grader, og kast deretter den røde supernatanten. Gjenta trinn 2 og 3 hvis lyseringen er ufullstendig.

4. Cellene ble resuspendert ved å tilsette 3-5 mL Hanks løsning eller serumfritt kulturmedium til den utfelte fraksjonen, og deretter sentrifugert ved 300-400 g i 3-5 min ved 4 grader. Dette trinnet ble gjentatt 2-3 ganger for å vaske cellene.

5. Resuspenderte celler med passende løsning etter behov for påfølgende eksperimenter; For RNA-ekstraksjon er det å foretrekke å bruke løsningen tilberedt med DEPC-vann i begynnelsen av trinn 4.

1. Ferskt antikoagulasjonsblod, kast supernatanten etter sentrifugering.

2. Forhåndsberegn volumet av celleutfelling og tilsett 2-8 graders forhåndskjølt lyseringsbuffer for røde blodlegemer i celleutfellingen i forholdet 1:6-10. For eksempel, for 0.2 mL celleutfelling, tilsett 1.2-2.0 mL lyseringsbuffer for røde blodlegemer, blås forsiktig for å blande og lysér for {{11} } min ved 4 grader eller romtemperatur.

3. Sentrifuger ved 800-1000 rpm i 5-8 min ved 4 grader, og kast deretter den røde supernatanten. Hvis erytrocyttlyset er ufullstendig, gjenta trinn 2 og 3 én gang;

4. Cellene ble resuspendert ved å tilsette Hanks løsning eller serumfritt kulturmedium til den utfelte fraksjonen, og deretter sentrifugert ved 300-400 g i 3-5 min ved 4 grader. Dette trinnet ble gjentatt 2-3 ganger for å vaske cellene;

5. Resuspenderte celler med passende løsning etter behov for påfølgende eksperimenter; For RNA-ekstraksjon er det å foretrekke å bruke løsningen tilberedt med DEPC-vann i begynnelsen av trinn 4.

1. Dette produktet har blitt filtrert og sterilisert. Vær oppmerksom på aseptisk drift for å unngå kontaminering.

2. Hvis oppfølgingstesten brukes til cellekultur, bør operasjonen gjennomføres på en ultra-ren benk med oppmerksomhet på aseptisk operasjon for å unngå kontaminering av cellene og påvirke cellekulturen.

3. Etter sentrifugalvasking, hvis en svært liten mengde erytrocytter blir funnet, kan testen fortsettes uten å påvirke den påfølgende påvisningen.

4. For din sikkerhet og helse, vennligst bruk vernebriller, hansker eller verneklær.

Kun for forskningsbruk!

Populære tags: røde blodceller lysis buffer, Kina røde blod cell lysis buffer produsenter, leverandører, fabrikk