Calcein-AM/PI Living / Dead Cell Double Staining Kit

 

Produktnavn	Katt. Ingen.	Spes.
Calcein-AM/PI Living / Dead cell Double Staining Kit	G 1707-100T	100T

 

 

Calcein AM er basert på Calcein (Calcein acetoxymethyl ester) og introduserer en acetylmethoxymethyl ester (AM) gruppe, som ikke bare maskerer den molekylære delen av Calcein som chelaterer kalsium, men også øker hydrofobiteten, og dermed lar Calcein AM lett trenge gjennom membranen til levende celler. Når Calcein AM kommer inn i cellen, er det i stand til å skjæres til Calcein av endogene cellulære esteraser. Med tap av AM-gruppen kan Calcein ikke lett passere gjennom cellemembranen og holdes dermed inne i cellen; i tillegg er den molekylære delen av det chelaterte kalsiumet delvis eksponert og Calcein-proben er i stand til å avgi en sterk grønn fluorescens når den er bundet til intracellulære kalsiumioner. Døde celler mangler esterase, som ikke kan hydrolysere Calcein AM til Calcein, og kan derfor ikke merkes. PI (propidiumjodid) er i stand til å bygge seg inn i den cellulære DNA-dobbelhelixen for å produsere rød fluorescens, men den kan ikke direkte farge cellemembranene til levende celler, og kan bare farge døde celler der cellemembranene har blitt ødelagt. Ved å kombinere Calcein-AM med PI tillater det farging av merking av både levende og døde celler.

Dette settet er basert på prinsippene ovenfor og har blitt optimalisert og feilsøkt av vårt firma for å utføre dobbelfargingsmerking ved Calcein-AM-merking av levende celler og PI-merking av døde celler, og dermed tillate analyse av både levende og døde cellenivåer.

 

 

Skip med våt is; Oppbevares ved -20 grader unna lys, gyldig i 12 måneder.

 

 

Komponentnummer	Komponent	G 1707-100T
G1707-1	Calcein-AM-løsning	20 μL
G1707-2	PI løsning	20 μL
G1707-3	Deteksjonsbuffer	10 ml
Håndbok		Ett eksemplar

Merk: Reaksjonstidene ovenfor er en enkelt 100 μL systemdeteksjon.

 

 

1. Fremstilling av Calcein AM/PI arbeidsløsning

a) Fjern Calcein-AM-løsning, PI-løsning og deteksjonsbuffer fra fryseren, og la dem deretter varmes opp til romtemperatur.

b) Konfigurer arbeidsløsningen i henhold til behovet, konfigurasjonssystemet kan referere til følgende tabell, merk at forskjellige celler har forskjellige egenskaper, eksperimentet kan legges til eller reduseres i henhold til den faktiske situasjonen for sondekonsentrasjonen som brukes, det meste av cellefortynningsforhold mellom 1:500-2000;

 

	10 prøver	50 prøver	100 prøver
Calcein-AM-løsning	2 μL	10 μL	20 μL
PI løsning	2 μL	10 μL	20 μL
Deteksjonsbuffer	1 ml	5 ml	10 ml

 

2. Cellefargingsmarkør:

a) I henhold til eksperimentelle krav, behandle cellene med medikamenter eller andre stimuleringer;

b) For adherente celler, samle supernatanten først, fordøy gjenværende adherente celler med trypsin og bland alle cellene godt. For suspenderte celler, samle alle celler direkte.

c) Sentrifuger de oppsamlede cellene ved 800-1,000 rpm i 3-5 min, fjern supernatanten og vask cellene grundig 2-3 ganger med PBS eller annen buffer for å fjerne gjenværende esteraseaktivitet;

d) Tilsett calcein AM/PI-deteksjonsarbeidsløsning til cellepelleten oppnådd ovenfor og resuspender cellene forsiktig og grundig. Vi anbefaler Calcein AM/PI-deteksjonsarbeidsløsning for å resuspendere cellene for å kontrollere celletettheten ved 1 × 105 ~ 1 × 106 /ml.

e) Inkuber ved 37ºC i 15-30 min i mørket.

3. Observasjon av cellefarging:

a) I henhold til de eksperimentelle kravene kan fluorescensmikroskop, flowcytometri, mikroplateleser og andre instrumenter brukes til å observere og analysere nivået av levende celler og døde celler;

b) De levende cellene merket med Calcein-AM er grønnfluorescerende, med EX/EM=494/517 nm; De merkede døde cellene til PI er rød fluorescens, EX/EM=535/617 nm.

 

 

1. På grunn av ulike celle-til-celle-egenskaper og ulike deteksjonsmetoder, er probekonsentrasjonen og inkubasjonstidsområdet beskrevet i trinn kun for referanse, og det kan justeres i henhold til den spesifikke situasjonen.

2. Alle fargestoffer har quenching-problemer. Vær borte fra lys mens du håndterer fluorescerende fargestoffer eller fargede prøver for å bremse slokkingen av fluorescens.

3. Calcein-AM er svært følsom for fuktighet, vennligst dispenser riktig i henhold til forsøksordningen når du bruker den for første gang. Calcein AM/PI-analysearbeidsløsning bør dispenseres og brukes nå.

4. For din helse og sikkerhet, vennligst bruk vernebriller, hansker eller verneklær.

 

Kun for forskningsbruk!

 

 

Populære tags: calcein-am/pi levende / døde celle dobbel farging sett, Kina calcein-am/pi levende / døde celle dobbel farging sett produsenter, leverandører, fabrikk