Kromatografisk kolonne for separering av eksosomer (cellesupernatant)

 

Produktnavn	Katt. Ingen.	Spes.
Kromatografisk kolonne for separering av eksosomer (cellesupernatant)	G4113-5	5 stk

 

 

Eksosomer er membranøse vesikler i nanoskala med ensartet størrelse og en partikkelstørrelse på 30 - 150 nm som aktivt skilles ut i det ekstracellulære rommet av celler. Disse vesiklene har sine egne spesifikke markører, og er belagt med proteiner, mRNA, miRNA, lipider og andre stoffer, som kan brukes som en vei for substans- og signalkommunikasjon mellom celler og delta i prosesser som cellevekst, celleproliferasjon, celledifferensiering, cellemigrasjon, angiogenese og tumorvekst.

Dette produktet er en størrelseseksklusjonskromatografikolonne (SEC) egnet for rask separasjon og rensing av eksosomer fra cellesupernatanter. Dette produktet bruker et cellesupernatantkonsentrasjonsmiddel for å separere og berike cellesupernatanteksosomer, og bruker deretter en ekstracellulær vesikkelseparasjonskromatografikolonne for å rense de konsentrerte eksosomer. Som ikke bare kan beholde høy renhet og høy aktivitet exosomes, men også effektivt fjerne proteiner; Effektivt unngå skade på den ekstracellulære membranstrukturen forårsaket av ultrahøy sentrifugalkraft i ultrahøyhastighets sentrifugeringsmetoden, og redusere påvirkningen av høykonsentrasjonsproteiner og andre stoffer på renheten til eksosomer i tradisjonelle nedbørsmetoder.

 

 

Transport ved romtemperatur; Oppbevares i romtemperatur med en gyldighetstid på 12 måneder.

 

 

Komponentnummer	Komponent	G4113-5
G4113-1	Kromatografisk kolonne for separering av eksosomer (cellesupernatant)	5 stk
G4113-2	Cellesupernatantkonsentrat	250 ml
Produktmanual		1 stk

 

 

1. Cellesupernatantkonsentrasjon

a) De biologiske prøvene av cellesupernatanten blir filtrert med 0.22 μM filtermembran og foreløpig renset for bruk;

b) Bland den biologiske prøven av cellesupernatanten og cellesupernatantkonsentratet i likt volum, rist kraftig i 15 sekunder og la det stå i 2 timer i kjøleskap ved 4 grader;

c) Plasser blandingen i en sentrifuge ved 4 grader ved 10000 × g i 60 minutter; Kast supernatanten;

d) 1 × PBS-buffer med 5 % volum av biologisk cellesupernatantprøve tilsettes til fullstendig resuspensjonsentrifugeutfelling;

e) Den tunge suspensjonen er rik på eksosomer, som kan brukes til påfølgende eksperimenter eller fryses ved -80 grad for sikkerhetskopiering.

2. Forberedelse for rensing av eksosomer

a) Forbered en romtemperatur, steril bufferløsning, slik som PBS (anbefalt G4202);

b) klargjør romtemperatur, steril 0.1M NaOH-reagens og 20 % etanol;

c) Før du bruker separasjonskolonnen, fjern det røde øvre dekselet på separasjonskolonnen og plasser det på en brakett (anbefalt G6063) for bruk;

3. Eksosomseparasjon

a) Forbered eksosomprøver etter konsentrasjon og resuspensjon av cellesupernatantkonsentrat for senere bruk;

b) Fjern det hvite bunndekselet på separasjonskolonnen, og etter at den beskyttende væsken inne i kolonnen strømmer ut, tilsett totalt 30 mL bufferløsning i batcher for å rense separasjonskolonnen;

c) Etter at all bufferen over silplaten kommer inn i separasjonskolonnen; Ta {{0}},5mL av reserveeksosomprøven fra trinn 3.a) og legg den til midten av silplaten (hvis mindre enn 0.5mL, tilsett bufferløsning for å lage opptil 0,5 ml);

d) Etter at alle eksosomprøver har passert gjennom silplaten og kommet inn i separasjonskolonnen, tilsett 2,5 ml bufferløsning;

e) Etter at all bufferløsningen i forrige trinn passerer gjennom silplaten og kommer inn i separasjonskolonnen, tilsett 1mL bufferløsning, og samle samtidig 1mL utvaskingsløsning, som er rik på naturlig aktive eksosomer; Den kan brukes for påfølgende eksperimenter eller fryses ved -80 grad for sikkerhetskopiering;

4. Postseparasjonsbehandling

a) Etter å ha fullført separasjonen av eksosomer, tilsett totalt 30 ml bufferløsning i batcher for å rense separasjonskolonnen;

b) Hvis det er nødvendig å fortsette å bruke separasjonskolonnen for å skille eksosomer fra cellesupernatanten, gjenta trinn 3.c) til 3.e);

c) Hvis det ikke er nødvendig å fortsette å bruke separasjonskolonnen for å skille eksosomer fra cellesupernatanten, tilsett først 5 mL 0.1M NaOH for å rense separasjonskolonnen, og tilsett deretter totalt 20 mL bufferløsning i partier for å rense og balansere separasjonskolonnen, og tilsett deretter 5 mL 20 % etanol for å rense separasjonskolonnen. Etter rengjøring, dekk det hvite bunndekselet til separasjonskolonnen; Til slutt tilsett 2 ml 20 % etanol for å fukte, dekk til og stram den røde toppen av separasjonskolonnen, og oppbevar separasjonskolonnen ved romtemperatur.

 

 

1. Ved separering av eksosomer fra forskjellige cellesupernatanter ved bruk av dette produktet, varierer elueringskurven og renheten litt, men det påvirker ikke den generelle trenden.

2. Under prosessen med å separere cellesupernatant-eksosomer fra dette produktet, er det nødvendig å unngå langvarig avbrudd av væskestrømmen i separasjonskolonnen.

3. Under bruk av dette produktet, ikke separer biologiske prøver fra forskjellige kilder på samme kolonne, og ikke gjenbruk samme kolonne mer enn 5 ganger.

4. Dette produktet er egnet for oppbevaring og bruk ved romtemperatur, og lavtemperaturbruk og høytemperaturoppvarming bør unngås.

5. Under eksperimentet, vennligst bruk laboratorieklær og engangshansker for å unngå kontaminering og sikre sikkerhet.

 

Kun for forskningsbruk!