SweMagrose IDA-Co magnetiske agaroseperler for His-Tag-proteinrensing

 

Produktnavn	Katt. Ingen.	Spes.
SweMagrose IDA-Co magnetiske agaroseperler for His-Tag-proteinrensing	G3655-1ML	1 ml
	G3655-5ML	5 ml

 

 

Dette produktet er laget av magnetiske agarosekuler modifisert av IDA og chelaterende nikkelioner. Den kan effektivt og raskt rense de histidinmerkede proteinene i biologiske prøver uten sentrifugalfiltrering. Operasjonen er enkel og egnet for rensing av løselige histidinmerkeproteiner uttrykt i supernatanten eller celler av bakterier, gjær og celler. Den kan også kombineres med høykapasitets proteinrenseutstyr for proteinscreening og separasjon.

Co2+ har 4 ligander og mindre uspesifikk adsorpsjon, Ni2+ har 6 ligander og sterk proteinbindingsevne, for flere målproteiner kan du velge våre andre SweMagrose IDA-Ni Magnetic Agarose Beads for His -Tag-proteinrensing (G3654).

 

 

Skip med våt is; Oppbevares ved 4 grader, gyldig i 12 måneder.

 

 

Komponentnummer	Komponent	G3655-1ML	G3655-5ML
G3655	SweMagrose IDA-Co magnetiske agaroseperler for His-Tag-proteinrensing	1 ml	5 ml
Håndbok		1 stk

 

 

1. Konfigurasjonen av forskjellige reagenser kan refereres til som følger. Brukere kan velge riktig mengde magnetiske perler og bufferformel i henhold til situasjonen til reagensene.

Komponent	Volum
10×PBS (200 mM natriumfosfat, pH 7,4)	50 ml
10x imidazolbuffer (200 mM natriumfosfat, 5 M imidazol, pH 7,4)	50 ml
Koboltfjerner (10 mM Tris-HCl, 500 mM NaCl, 100 mM EDTA, pH 7,4)	10 ml
Alkalisk vaskeløsning (0,5 M NaOH, 2 M NaCl)	10 ml
href="javascript:;" Koboltsulfat (100 mM CoSO4)	15 ml
Konserveringsløsning (20 % etanol)	50 ml

 

2. Bufferkonfigurasjon

Bindingsytelsen til målproteinet med metallion-chelaterende perler vil direkte påvirke renseeffektiviteten til målproteinet, og ulike buffere vil også påvirke gjenvinningen og renheten til målproteinet til en viss grad. Derfor, før storskala proteinrensing, bør brukere designe sine egne eksperimenter for å screene buffere som er egnet for målproteinet, inkludert bindingsbuffer, vaskebuffer og elueringsbuffer. Buffersystemet nedenfor er egnet for rensing av de fleste histidinmerkeproteiner for brukerens referanse.:

Bindingsbuffer: 20 mM natriumfosfat, 500 mM NaCl, 5~50 mM imidazol, pH 7,4

Vaskebuffer: 20 mM natriumfosfat, 500 mM NaCl, 50~100 mM imidazol, pH 7,4

Elueringsbuffer: 20 mM natriumfosfat, 500 mM NaCl, 500 mM imidazol, pH 7,4

3. Prøvebehandling

a) E. coli, gjær og andre intracellulært uttrykte proteiner: tilsett 5~10 mL bindingsbuffer per gram celler, tilsett proteasehemmer (f.eks. PMSF i en sluttkonsentrasjon på 1 mM), resuspender cellene og lyser med ultralyd celler i et isbad, dvs. råproteinprøven. Hvis prøven er for viskøs, kan passende mengde nuklease tilsettes til råprøven etter behov og plasseres på is i 30 minutter for å bryte ned nukleinsyrene. Alternativt kan sentrifugering av proteinprøven utføres etter behov.

b) Ekstracellulært uttrykt protein: Råproteinprøven ble oppnådd når den ekstracellulære ekspresjonssupernatanten ble fortynnet med en lik mengde bindingsbuffer.

c) Intracellulært uttrykte proteiner i dyreceller: Ta passende mengde dyreceller, vask med passende mengde PBS (selvforsynt) én gang, kast supernatanten, resuspender med passende mengde Binding Buffer som inneholder 1 % (v/v) Triton X -100 eller 1 % (v/v) NP-40, tilsett proteasehemmer (f.eks. PMSF ved en sluttkonsentrasjon på 1 mM), og legg den på is i 10 minutter, det er en råproteinprøve.

4. Binding av målprotein til magnetiske perler:

a) Suspender 2 g våtvekt av organismene med 10 mL Binding Buffer, og etter fragmentering og lysis tilsettes en prøve av målråproteinet til et sentrifugerør som inneholder forhåndsbehandlede magnetiske perler, og røret plasseres i en vortex-mikser og ristet i 15 s. Målråproteinprøven tilsettes deretter til et sentrifugerør med forhåndsbehandlede magnetiske kuler.

b) Plasser sentrifugerøret på en roterende mikser i 20-30 min ved romtemperatur (kan om nødvendig rotere og blande i 1 time ved en lav temperatur på 2-8 grader for å forhindre nedbrytning av målproteinet) .

c) Plasser sentrifugerøret på den magnetiske separatoren for separering, overfør supernatanten til et nytt sentrifugerør for påfølgende testing, og fjern sentrifugerøret fra den magnetiske separatoren for påfølgende vasketrinn.

5. Magnetisk perlevask:

a) Tilsett 10 mL vaskebuffer til sentrifugerøret som inneholder de magnetiske perlene, snu røret forsiktig flere ganger for å resuspendere perlene, separer dem magnetisk og overfør vaskeløsningen til et nytt sentrifugerør for prøvetaking. Gjenta denne prosedyren én gang.

b) Tilsett 10 mL vaskebuffer til sentrifugerøret som inneholder magnetiske perler for å resuspendere perlene, overfør perlesuspensjonen til et nytt sentrifugerør (for å unngå kontaminering av målproteiner med ikke-spesifikt adsorberte proteiner på veggen av det originale sentrifugerøret ), separer magnetisk og pipetter supernatanten inn i vaskebufferoppsamlingsrøret.

6. Målproteineluering

a) Brukere kan justere konsentrasjonen av målprotein ved å endre elueringsvolumet etter behov. Tilsett 2-10 mL elueringsbuffer, vri røret forsiktig flere ganger for å suspendere kulene, separer perlene magnetisk og samle eluatet i et nytt sentrifugerør, som er den rensede målproteinprøven.

a) Gjenta om nødvendig trinnene ovenfor én gang for å samle prøven i et nytt sentrifugerør for å teste om målproteinet elueres fullstendig.

b) Påvis målproteinet ved SDS-PAGE eller Western blotting. Hvis du trenger å måle proteinkonsentrasjonen, kan du bruke elueringsbuffer for å nullstille konsentrasjonen, eller bruke dialyse eller ultrafiltrering for å fjerne Imidazol og deretter måle konsentrasjonen.

7. Magnetisk perle etterbehandling

a) Tilsett 5 mL elueringsbuffer til sentrifugerøret som inneholder de magnetiske kulene, snu røret opp og ned flere ganger for å suspendere kulene, separer dem magnetisk og fjern supernatanten.

b) Gjenta trinnene ovenfor to ganger.

c) Tilsett 5 mL ddH O til sentrifugerøret som inneholder de magnetiske perlene, snu røret opp og ned flere ganger for å suspendere perlene, separer dem magnetisk og fjern supernatanten.

d) Gjenta trinnene ovenfor to ganger.

e) Tilsett konserveringsløsningen til de magnetiske kulene for å lage et totalt volum på 5 ml, lagre ved 2-30 grad (for langtidslagring, plasser ved 2-8 grad), og kan brukes til neste rensing av det samme proteinet.

8. Magnetisk perleregenerering

Når de magnetiske perlene brukes kontinuerlig i 3 eller flere ganger, kan evnen til å binde målproteiner reduseres betydelig, og det anbefales å utføre den magnetiske perleregenereringsprosessen. Ta 5 mL 10 % (v/v) magnetisk perlesuspensjon som et eksempel for å illustrere den magnetiske perleregenereringsoperasjonen i detalj.

a) Den magnetiske perlesuspensjonen ble magnetisk separert, fjern supernatanten og fjern sentrifugerøret fra den magnetiske separatoren, tilsett 5 mL ddH2O til sentrifugerøret og snu sentrifugerøret opp og ned flere ganger for å resuspendere de magnetiske perlene Separeres magnetisk og fjern supernatanten.

b) Tilsett 5 mL koboltfjerner, snu sentrifugerøret opp og ned flere ganger for å resuspendere de magnetiske kulene, roter og bland i 5 minutter ved romtemperatur, separer magnetisk og fjern supernatanten. Gjenta dette trinnet én gang.

c) Tilsett 5 mL ddH2O til sentrifugerøret som inneholder de magnetiske perlene, snu røret opp og ned flere ganger for å suspendere perlene, separer dem magnetisk og fjern supernatanten.

d) Alkalisk behandling (valgfritt trinn): tilsett 5 mL alkalisk vaskebuffer, snu sentrifugerøret opp og ned flere ganger for å resuspendere kulene, roter og bland i 5 minutter ved romtemperatur, separer magnetisk og fjern supernatanten. Tilsett 5 mL ddH2O, snu sentrifugerøret opp og ned flere ganger for å resuspendere perlene, separer magnetisk og fjern supernatanten. Gjenta ddH2O-vasketrinnet 3-5 ganger til vaskeløsningen er nøytral.

e) Tilsett 5 mL nikkelklorid, snu sentrifugerøret opp og ned flere ganger for å resuspendere kulene, roter og bland i 20 minutter ved romtemperatur, separer magnetisk og fjern supernatanten.

f) Tilsett 5 mL ddH2O og snu sentrifugerøret opp og ned flere ganger for å resuspendere kulene, magnetisk separer og fjern supernatanten. Gjenta dette trinnet 4 ganger.

g) Tilsett konserveringsløsningen til de magnetiske perlene for å lage et totalt volum på 5 mL og oppbevar ved 2-30 grad (for langtidslagring, plasser ved 2-8 grad).

 

 

1. Dette produktet er lagret i 20 % etanol og bør skiftes ut før bruk.

2. Ikke frys eller tørk perlene, da dette kan påvirke den endelige bruken.

3. Bruk med en matchende magnetisk ramme.

 

Kun til forskningsbruk. Ikke til bruk i diagnostiske eller terapeutiske prosedyrer!

 

 

Populære tags: swemagrose ida-co magnetiske agaroseperler for proteinrensing av hans-tag, Kina swemagrose ida-co magnetiske agaroseperler for proteinrensing av hans-tag, produsenter, leverandører, fabrikk